免疫荧光染色如何分析？！科研人怎么能不会用image J和prism 呢！

Colin梦:
弹幕上有一条问题，不需要计算细胞的数量吗？我们做的时候要统计DAPI细胞的数量然后用Mean/细胞数

【回复】本身mean值是全部的荧光强度除以全部的细胞面积获得的 不用再除以细胞数呀 我们一般会单独计数共染的细胞数来做显著性分析
【回复】回复 @爱吃绿豆饼的小倪 :那如果是某指标荧光强度一样但是细胞数量不同的两张片子，本身也是有差异的，但这么计算是没有差异的啊？
【回复】回复 @爱吃绿豆饼的小倪 :但是目的荧光的面积和DAPI的面积是不一样的，那是不是要用目的荧光的总荧光强度 除以 DAPI对应的面积？
要上岸的小学生:
感觉有点问题。这样做出来。我的阳性对照组。mean最低。阳性对照组肉眼可见的荧光最多。结果反而最低。有点点不靠谱这样计算

【回复】我的也是，计算一整张图，明显的有很多荧光点的mean值反倒低。请问一下你后面是用了什么参数比较呀？
【回复】而且其实算荧光强度 细胞实验可能还有点用 动物的染色就不太行
【回复】mean值是不是灰度强度而不是荧光强度
2014Sarah:
楼主好，请问组织蜡块做的免疫荧光怎么定量分析？

【回复】啊，最后不都是上片子看荧光么？跟蜡块冰块有什么关系嘞？我就是蜡块做的片子呀？
磊哥就是牛5:
如果目的蛋白是绿光，是不是应该选绿光通道进行分析？

【回复】你主要看哪个通道就分析哪个就行
【回复】回复 @一点都不咸 :选了绿色通道以后在threshold这一栏还选red吗 我的选出来怎么看着怪怪的
白羊yang:
up主为什么不直接对红色通道的进行分析呢 为什么还要用总图分离通道呢？

【回复】因为习惯了哈哈 一般都是两张都要分析 自己想给大家演示一下怎么分离通道 而且我试过 好像结果和直接分析的不太一样？
【回复】回复 @白羊yang :那要选哪个方法好呀
【回复】回复 @白羊yang :可以看一下我的最新一期的视频
搞科研的颠公:
up主，问一下merge的荧光强度怎么分析吗？就是拍照的时候会有一个绿色的荧光图和一个红色的荧光图，然后用软件可以把这两个图merged出来，这样的话，应该是有三个荧光强度值

【回复】回复 @吃人陈一欧呦 : 拆分完之后每个色彩通道单独分析，每个通道的阈值不同，但每组的相同通道阈值要保持一致。比如A组绿色阈值和B组阈值相同。
【回复】解决了吗？我也有同一个问题
【回复】就这三个，应该怎么分析啊？一样的分析吗？
_薛定喵的鳄_:
请问这样计算的纵坐标是什么呢，谢谢

【回复】回复 @小汤圆古拉ly : 姐妹你会了吗，怎么标呀，relative intensity fluorescence？
【回复】请问你后来弄明白了吗[微笑]
芒果街上的小兔:
归一化的部分可不可以再讲清楚一点点呢？[撇嘴]

【回复】回复 @Joseph民 : 对照组是0，阴性对照，怎么除以它
【回复】对照组平均值算出来，其他的除以它
小仙女的陈柴柴:
想问一下up主知道怎么用image J去除荧光照片中的明亮的杂点嘛，染的是绿色但是感觉有杂质没洗干净也是绿色，这样算荧光强度的时候是不是应该先把明亮的杂点处理一下呢

【回复】请问楼主最后解决了吗？
bili_66172876063:
您好小姐姐姐，我想问一下，我设置了3个时间梯度，1.2.3个月分别，这样3个对照3个实验组，那么归一化是否可以所有组的灰度值除以第一个月的对照组？因为他们都有时间关系。非常感谢指导。

【回复】请问这个问题解决了吗？求指教
Shepherdhhhhh:
能用单通道的图片进行分析吗？而不是用merge的图片？

【回复】我上课的时候老师说 我们用merge （合成？合并？）后的图片打开单通道 ，每个通道显示的是一个“grey”的色调 可以更好的比较brightness（对比度？我糟糕的国语）
【回复】我也想问这个 解决了吗
阿波左眼:
学姐，我染了edu和33342。一个是红色，一个是蓝色。我是分开统计，还是统计merge后的？

【回复】两个荧光强度都可以分析呀 然后你要是分析共染可以数细胞数
【回复】回复 @爱吃绿豆饼的小倪 :手动挨个数可能会把我累死。😂
【回复】回复 @爱吃绿豆饼的小倪 :好的好的！期待！
小李大鹏一世:
感觉最后是不是要进行一下翻转呀，不然最后的结果感觉是反着的，面积大的平均值反而小，后面计算阈值的时候应该点击一下应用，然后再点击“Lut”键进行翻转，使想要检测的地方变成黑色，再进行计算

nocross22:
up主，想问一下如果选图片中部分点进行分析，而不是所有点，该如何操作呢